Genetic variability of Leishmania (Leishmania) infantum causing human visceral leishmaniasis in the Southeastern Brazil

ABSTRACT Leishmania infantum is a protozoan that causes visceral leishmaniasis (VL) in the Americas and some regions of Europe. The disease is mainly characterized by hepatosplenomegaly and fever, and can be fatal. Factors related to the host and parasite can contribute to the transmission of Leishmania and the clinical outcome. The intraspecific genetic variability of L. infantum strains may be one of these factors. In this study, we evaluated the genetic variability of L. infantum obtained from bone marrow smear slides from patients in the Sao Paulo State, Brazil. For this, the minicircle of the kDNA hypervariable region was used as target by Sanger sequencing. By analyzing the similarity of the nucleotides and the maximum likelihood tree (Fasttree), we observed a high similarity (98%) among samples. Moreover, we identified four different profiles of L. infantum. In conclusion, L. infantum strains from Sao Paulo State, Brazil, showed low diversity measured by minicircle of the kDNA hypervariable region.

The path of canine visceral leishmaniasis versus the path of Center for Zoonoses Control: contributions of spatial analysis to health / O caminho da leishmaniose visceral canina versus o caminho do Centro de Controle de Zoonoses: contribuições da análise espacial para a saúde / La trayectoria de la leishmaniasis visceral canina versus la trayectoria del Centro para el Control de Zoonoses: contribuciones del análisis espacial a la salud

Visceral leishmaniasis (VL) is a public health problem in Brazilian municipalities. As much as there is a planning of public policies regards VL in São Paulo State, new cases have been reported and spread. This paper aims to discuss how the Center for Zoonoses Control conducts its actions spatially in endemic city of Presidente Prudente, São Paulo State. Data are from the Municipal Health Department of Presidente Prudente, Adolfo Lutz Institute, and Brazilian Institute of Geography and Statistics. We spatially estimated the dog population per census tract and used geoprocessing tools to perform choropleth maps, spatial trends, and spatial autocorrelation. We found a spatial pattern of higher prevalence in the city's outskirt and a positive statistically significant spatial autocorrelation (I = 0.2, p-value < 0.000) with clusters of high-high relationships in the Northwest part of the city. Moreover, we identified a different direction in the path of the conducted serosurveys versus the canine VL trend, which stresses the fragility of the Center for Zoonoses Control actions to control the disease. The Center for Zoonoses Control always seems to chase the disease. The spatial analysis may be useful for rethinking how the service works and helps in public policies.

A leishmaniose visceral (LV) é um problema de saúde pública nas cidades brasileiras. Por mais que haja um planejamento de políticas públicas para LV no Estado de São Paulo, Brasil, novos casos têm sido notificados e se disseminado. O artigo objetiva discutir como o Centro de Controle de Zoonoses realiza suas atividades espacialmente em uma cidade endêmica, Presidente Prudente, no Estado de São Paulo. Os dados são da Secretaria Municipal de Saúde de Presidente Prudente, Instituto Adolfo Lutz e Instituto Brasileiro de Geografia e Estatística. Estimamos espacialmente a população canina por setor censitário e utilizamos ferramentas de geoprocessamento para produzir mapas coropléticos, tendências espaciais e autocorrelação espacial. Encontramos um padrão espacial de maior prevalência na periferia da cidade e uma autocorrelação espacial positiva estatisticamente significativa (I = 0,2; p < 0,000) com clusters de relação alta-alta no noroeste da cidade. Além disso, identificamos uma direção diferente no caminho dos inquéritos sorológicos realizados versus a tendência na LV canina, o que enfatiza a fragilidade das medidas de controle do Centro de Controle de Zoonoses para controlar casos da doença. O Centro de Controle de Zoonoses parece estar sempre correndo atrás da doença. A análise espacial pode ser útil para repensar o funcionamento do serviço e auxiliar as políticas públicas.

La leishmaniasis visceral (LV) es un problema de salud pública en las ciudades brasileñas. Aunque hay políticas públicas de planificación relacionadas con la LV en el estado de São Paulo, Brasil, se han informado de nuevos casos, además de su propagación. El objetivo de este trabajo es discutir cómo el Centro de Control de Zoonosis dirige sus acciones espacialmente en una ciudad endémica del estado de São Paulo, Presidente Prudente. Los datos proceden de la Secretaría Municipal de Salud de Presidente Prudente, del Instituto Adolfo Lutz, y del Instituto Brasileño de Geografía y Estadística. Estimamos espacialmente la población de perros por sector censal y utilizamos herramientas de geoprocesamiento para elaborar mapas de coropletas, tendencias espaciales, y autocorrelación espacial. Encontramos un patrón espacial de más alta prevalencia en la periferia de la ciudad, además de una autocorrelación espacial positiva y estadísticamente significativa (I = 0,2; valor de p < 0,000) con clústeres de relaciones alto-alto en la parte noroccidental de la ciudad. Además, identificamos una dirección diferente en la trayectoria de las encuestas serológicas llevadas a cabo, frente a la tendencia de LV canina, que enfatiza la debilidad de acciones del Centro de Control de Zoonosis para controlar casos de la enfermedad. El Centro de Control de Zoonosis parece siempre estar tras la enfermedad. El análisis espacial podría ser útil para repensar cómo está funcionando el servicio, además de ayudar a políticas públicas.

Controle da leishmaniose visceral canina por eutanásia: estimativa de efeito baseado em inquérito e modelagem matemática / Control of canine visceral leishmaniasis by euthanasia: estimated effect based on a survey and mathematical modeling / Control de la leishmaniasis visceral canina por eutanasia: estimación del efecto basado en una encuesta y modelo matemático

A leishmaniose visceral é uma doença emergente e negligenciada em processo de expansão para áreas urbanas. A incidência da doença humana está relacionada com a infecção canina. Araçatuba e Birigui são municípios do Estado de São Paulo, Brasil, com soroprevalência da infecção canina de 8 a 10%, que empregam estratégias de controle voltadas ao reservatório canino baseado em inquérito sorológico e eutanásia dos cães soropositivos. Usando dados desses programas de controle para parametrizar modelos matemáticos, este estudo avaliou a eficácia dessas atividades. Estimamos que o controle atualmente empregado é capaz de reduzir em cerca de 20% a incidência de casos de leishmaniose visceral canina (LVC). Considerando-se um controle contínuo e um esforço das atividades de inquérito sorológico igual ao triplo da média do observado em Araçatuba e Birigui, a atividade de eutanásia de cães com diagnóstico positivo seria efetiva para o controle da infecção canina. Embora teoricamente possível, na prática, o controle da LVC com as estratégias preconizadas atualmente é insuficiente, pois exigiria superpor dificuldades enfrentadas por estas atividades como falta de recursos materiais, humanos e financeiros, além das questões éticas e jurídicas associadas.

Visceral leishmaniasis is an emerging and neglected disease that is currently expanding to urban areas. The incidence of human disease is related to canine infection. Araçatuba and Birigui are municipalities (counties) in the state of São Paulo, Brazil, with 8-10% seroprevalence of canine infection and that employ control strategies targeting the canine reservoir, based on serological survey and culling of seropositive dogs. Using data from these control programs to parameterize mathematical models, this study assessed the efficacy of these activities. We estimated that current control is capable of reducing the incidence of canine visceral leishmaniasis (CVL) by approximately 20%. Assuming continuous control and three times the current serological survey activities in Araçatuba and Birigui, culling dogs with a positive CVL diagnosis would be effective for the control of canine infection. Although theoretically possible, in practice the control of CVL with the currently recommended strategies is insufficient, since it would require overcoming the difficulties in these activities, such as lack of material, human, and financial resources, besides associated ethical and legal issues.

La leishmaniasis visceral es una enfermedad emergente y pasada por alto en proceso de expansión hacia áreas urbanas. La incidencia de la enfermedad humana está relacionada con la infección canina. Araçatuba y Birigui son municipios del estado de São Paulo, Brasil, con una seroprevalencia de infección canina de un 8 a un 10% que emplean estrategias de control dirigidas al reservorio canino, basado en una encuesta serológica y eutanasia de los perros seropositivos. Usando datos de esos programas de control para proporcionar parámetros en modelos matemáticos, este estudio evaluó la eficacia de esas actividades. Estimamos que el control actualmente empleado es capaz de reducir cerca de un 20% la incidencia de casos de leishmaniasis visceral canina (LVC). Si se considera un control continuo y un esfuerzo de las actividades de encuesta serológica igual al triple de la media de lo observado en Araçatuba y Birigui, la actividad de eutanasia de perros con diagnóstico positivo sería efectiva para el control de la infección canina. A pesar de que teóricamente es posible, en la práctica el control de la LVC con las estrategias preconizadas actualmente es insuficiente, puesto que exigiría superar dificultades a las que se enfrentan estas actividades como la falta de recursos materiales, humanos y financieros, además de las cuestiones éticas y jurídicas asociadas.

Avaliação da efetividade do uso de coleiras impregnadas com deltametrina no controle da leishmaniose visceral no município de Votuporanga, Estado de São Paulo, Brasil, 2014 ­ 2016 / Evaluation of the effectiveness of using deltamethrinimpregnated collars to control visceral leishmaniasis in the municipality of Votuporanga, State of São Paulo, Brazil, 2014 ­ 2016

O objetivo deste artigo é apresentar os principais resultados do Projeto de Inovação Tecnológica em Saúde realizado entre 2014 e 2015, destacando-se o uso de coleiras impregnadas com deltametrina a 4% em cães em uma região endêmica para leishmaniose visceral (LV), o município de Votuporanga, São Paulo, Brasil. Neste município, anterior à realização do projeto, eram registrados muitos casos caninos e humanos da doença, com elevada taxa de letalidade. Durante o projeto, foram monitorados cerca de 16,5 mil cães, examinadas 25.700 amostras de sangue, considerando-se as perdas e as entradas de novos animais durante os quatro inquéritos sorológicos. Após sua finalização, verificou-se uma diminuição da prevalência e incidência de LV canina, assim como do número de casos humanos. A diminuição dos casos caninos foi correlacionada positivamente aos casos humanos no período de 2011 a 2016 (Correlação de Pearson de 0.914, p-valor<0.05). Além disso, a análise espacial dos resultados corrobora a diminuição ou desaparecimento da concentração de casos caninos e, consequentemente, de fontes e de infecção nas áreas endêmicas à medida que avançaram no tempo e espaço as diferentes etapas de desenvolvimento do projeto. Apesar da drástica redução na incidência da LV canina, ainda permaneceram algumas áreas críticas. Os resultados delineados sugerem a revisão de protocolos e manuais demonstrando a efetividade do uso das coleiras como medida preventiva e potencial no controle da LV. (AU)

This paper aims to present the main results of the Health Technology Innovation Project carried out between 2014 and 2015, which evaluates the use of 4% deltamethrin-impregnated collars in dogs, in an endemic region for visceral leishmaniasis (VL), the municipality of Votuporanga, São Paulo, Brazil. Before this project, Votuporanga had notified canine and human cases of the disease, with a high case fatality rate. We monitored approximately 16.5 thousand dogs, 25,700 blood samples analyzed, considering losses and entrances of new animals during the four serological surveys. After the project, the prevalence and incidence of canine VL decreased as well as the number of human cases. We found a positive correlation between the decrease of infected dogs and human cases from 2011 to 2016 (Pearson correlation of 0.914, p-value <0.05). Furthermore, the spatial analysis of the results indicated areas with canine cases concentration that decreased its intensity or disappeared concomitantly to the project levels in the space-time. Despite the drastic reduction in the incidence of canine VL, some critical areas remain. The current results suggest the review of protocols and manuals demonstrating the effectiveness of the use of collars as a preventive measure and potential in the control of VL. (AU)

Avaliação da efetividade do uso de coleiras impregnadas com deltametrina no controle da leishmaniose visceral no município de Votuporanga, Estado de São Paulo, Brasil, 2014 – 2016 / Evaluation of the effectiveness of using deltamethrinimpregnated collars to control visceral leishmaniasis in the municipality of Votuporanga, State of São Paulo, Brazil, 2014 – 2016

O objetivo deste artigo é apresentar os principais resultados do Projeto de Inovação Tecnológica em Saúde realizado entre 2014 e 2015, destacando-se o uso de coleiras impregnadas com deltametrina a 4% em cães em uma região endêmica para leishmaniose visceral (LV), o município de Votuporanga, São Paulo, Brasil. Neste município, anterior à realização do projeto, eram registrados muitos casos caninos e humanos da doença, com elevada taxa de letalidade. Durante o projeto, foram monitorados cerca de 16,5 mil cães, examinadas 25.700 amostras de sangue, considerando-se as perdas e as entradas de novos animais durante os quatro inquéritos sorológicos. Após sua finalização, verificou-se uma diminuição da prevalência e incidência de LV canina, assim como do número de casos humanos. A diminuição dos casos caninos foi correlacionada positivamente aos casos humanos no período de 2011 a 2016 (Correlação de Pearson de 0.914, p-valor<0.05). Além disso, a análise espacial dos resultados corrobora a diminuição ou desaparecimento da concentração de casos caninos e, consequentemente, de fontes e de infecção nas áreas endêmicas à medida que avançaram no tempo e espaço as diferentes etapas de desenvolvimento do projeto. Apesar da drástica redução na incidência da LV canina, ainda permaneceram algumas áreas críticas. Os resultados delineados sugerem a revisão de protocolos e manuais demonstrando a efetividade do uso das coleiras como medida preventiva e potencial no controle da LV.

This paper aims to present the main results of the Health Technology Innovation Project carried out between 2014 and 2015, which evaluates the use of 4% deltamethrin-impregnated collars in dogs, in an endemic region for visceral leishmaniasis (VL), the municipality of Votuporanga, São Paulo, Brazil. Before this project, Votuporanga had notified canine and human cases of the disease, with a high case fatality rate. We monitored approximately 16.5 thousand dogs, 25,700 blood samples analyzed, considering losses and entrances of new animals during the four serological surveys. After the project, the prevalence and incidence of canine VL decreased as well as the number of human cases. We found a positive correlation between the decrease of infected dogs and human cases from 2011 to 2016 (Pearson correlation of 0.914, p-value <0.05). Furthermore, the spatial analysis of the results indicated areas with canine cases concentration that decreased its intensity or disappeared concomitantly to the project levels in the space-time. Despite the drastic reduction in the incidence of canine VL, some critical areas remain. The current results suggest the review of protocols and manuals demonstrating the effectiveness of the use of collars as a preventive measure and potential in the control of VL.

Human visceral leishmaniasis and relationship with vector and canine control measures / Leishmaniose visceral em humanos e relação com medidas de controle vetorial e canino

ABSTRACT OBJECTIVE Estimate the coverage of control measures of visceral leishmaniasis and relate them with the occurrence of human visceral leishmaniasis in endemic urban area. METHODS Cases of human and canine visceral leishmaniasis were considered as study population and evaluated by a serological survey conducted in Araçatuba, state São Paulo, from 2007 to 2015. The cases of human visceral leishmaniasis were geocoded by the address of the patients and the canine disease by the address of the dogs' owners. The coverage of serological survey, euthanasia, and insecticide spraying was calculated, as well as the canine seroprevalence and the incidence rates of human visceral leishmaniasis. The relationship between human visceral leishmaniasis and control measures was evaluated, as well as the seroprevalence by comparing maps and by linear regression. The relationship between the canine and the human disease was also evaluated by the Ripley's K function. RESULTS The incidence rates of human visceral leishmaniasis showed a period of decline (2007 to 2009) and a period of stability (2010 to 2015), a behavior similar to that of canine seroprevalence. In general, the coverage of control measures was low, and the non-association with the incidence of human visceral leishmaniasis can be a result of the period analyzed and of the small number of analyzed units (sectors of the Superintendence for the Control of Endemic Diseases). The distribution of human cases showed spatial dependence with the distribution of seropositive dogs from 2007 to 2009. CONCLUSIONS This study reaffirmed the relationship between the occurrence of the disease in humans and dogs, it verified a decrease in the rates of visceral leishmaniasis in Araçatuba over time, even at low coverage of control activities. However, further studies are needed to determine if factors beyond monitoring and control measures are involved in the reduction of incidences.

RESUMO OBJETIVO Estimar a cobertura das atividades de controle da leishmaniose visceral e relacioná-las com a ocorrência de leishmaniose visceral em humanos em área urbana endêmica. MÉTODOS Foram considerados como população de estudo os casos de leishmaniose visceral em humanos e em cães avaliados por inquérito sorológico censitário realizado em Araçatuba, SP, de 2007 a 2015. Os casos de leishmaniose visceral em humanos foram geocodificados pelo endereço de residência dos pacientes e, os cães, pelo endereço de residências dos respectivos tutores. Foram calculadas as coberturas do inquérito sorológico, da eutanásia e de borrifação de inseticida, as soroprevalências caninas e as taxas de incidência de leishmaniose visceral em humanos. A relação entre a leishmaniose visceral em humanos e as medidas de controle, bem como a soroprevalência foram avaliadas por comparação de mapas e por meio de regressão linear. A relação entre a doença canina e a humana também foi avaliada por meio da função K de Ripley . RESULTADOS As taxas de incidência de leishmaniose visceral em humanos apresentaram um período de declínio (2007 a 2009) e um período de estabilidade (2010 a 2015), comportamento semelhante ao das soroprevalências caninas. Em geral, a cobertura das medidas de controle foi baixa e a não associação com a incidência de leishmaniose visceral em humanos pode ser consequência do período analisado e do número pequeno de unidades analisadas (setores da Superintendência de Controle de Endemias). A distribuição dos casos humanos apresentou dependência espacial com a distribuição dos cães soropositivos de 2007 a 2009. CONCLUSÕES Este trabalho reafirmou a relação entre a ocorrência da doença no homem e no cão, verificou a diminuição das taxas de leishmaniose visceral em humanos e em cães em Araçatuba ao longo do tempo, mesmo em baixa cobertura das atividades de controle. Entretanto, novos estudos são necessários para averiguar se fatores além das atividades de vigilância e controle estariam envolvidos na diminuição das incidências.

Avaliação do exame imuno-histoquímico para o diagnóstico de Leishmania spp. em amostras de tecidos caninos / Evaluation of immunohistochemical technique for the diagnosis of Leishmania spp. in canine tissues samples

No Brasil, as leishmanioses representam um importante problema de saúde pública pela sua elevada incidência, ampla distribuição geográfica e marcante aumento na transmissão associados à urbanização da doença. Cães são considerados os principais reservatórios da leishmaniose visceral (LV) no ambiente urbano, tornando-se fundamental o aprimoramento do diagnóstico dadoença nessa espécie. Este estudo objetivou a avaliação da técnica de imuno-histoquímica (IHQ) para o diagnóstico de Leishmania spp. em amostras de diferentes tecidos de cães recebidas no Núcleo de Patologia Quantitativa do Instituto Adolfo Lutz (NPQ-IAL). Amostras de tecidos coletadas de 134 cães, provenientes de municípios do Estado de São Paulo, positivos para LV por teste rápido(TR DPP®-Bio-Manguinhos), ensaio imunoenzimático-EIE/Elisa (Bio-Manguinhos) e pela reação em cadeia de polimerase, foram submetidas a marcação IHQ específica, em duplicata. A reação de IHQ apresentou sensibilidade de 98,51 %, especificidade de 100,00 % e acurácia de 98,61 %. A maior positividade foi detectada nas amostras de baço. O índice Kappa foi de 0,84 entre os resultados da análise dos tecidos em duplicata. A técnica de IHQ pode ser utilizada como uma técnica rotineirapara o diagnóstico das leishmanioses caninas, sendo padronizada e implantada no NPQ-IAL.

In Brazil, leishmaniasis represents an important public health problem due to its high incidence, wide geographic distribution and marked increase in transmission associated to the urbanization of the disease. Dogs are considered the main reservoirs of visceral leishmaniasis (VL) in the urban environment, making it fundamental to improve the diagnosis of this species. This study aimed at the evaluation of the immunohistochemical technique (IHC) for the diagnosis of Leishmania spp. In samples of different dog tissues received at the Adolfo Lutz Institute's Quantitative Pathology Center (NPQ-IAL). Tissue specimens collected from 134 dogs, from municipalities in the State of São Paulo, positive for LV by rapid test (TR DPP®-Bio-Manguinhos), enzyme-linked immunosorbent assay (EIE / Elisa (Bio-Manguinhos) and the chain reaction of Polymerase, were subjected to specific IHQ labeling, in duplicate. The IHQ reaction showed sensitivity of 98.51%, specificity of 100.00% and accuracy of 98.61%. The highest positivity was detected in spleen samples. The Kappa index was 0.84 between the results of the tissue analysis in duplicate. The IHC technique can be used as a routine technique for the diagnosis of canine leishmaniasis, being standardized and implanted in the NPQ-IAL.

Evaluation of immunohistochemical technique for the diagnosis of Leishmania spp. in canine tissues samples / Avaliação do exame imuno-histoquímico para o diagnóstico de Leishmania spp. em amostras de tecidos caninos

In Brazil, leishmaniasis represents a major public health problem due to its high incidence, wide distribution and remarkable increase in transmission associated with the disease urbanization. Dogs are considered as the main reservoirs of visceral leishmaniasis (VL) in the urban environment and diagnosis improvement was fundamental in this species. This study aimed at evaluating the immunohistochemical technique (IHC) for diagnosing Leishmania spp. in differents tissues samples collected from dogs. This investigation was performed at the Quantitative Pathology Center of the Institute Adolfo Lutz (NPQ-IAL). Tissue samples collected from 134 dogs, derived from municipalities of São Paulo State, positive for VL by rapid testing (TR DPP® - Bio-Manguinhos), enzyme-linked immunosorbent assay (EIA/ELISA - Bio-Manguinhos), and polymerase chain reaction, were analyzed by specific IHC in duplicate. These dogs were previously diagnosed as VL. IHC showed sensitivity of 98.51 %, specificity of 100.00 %, positive predictive value of 100.00 %, negative predictive value of 83.33 % and accuracy of 98.61 %. The major positivity was detected in spleen samples. Kappa index between the tissues duplicate results was of 0.84. IHC technique, standardized and implemented at NPQ-IAL, showed to be suitable to be used as routine test for diagnosing canine leishmaniasis effectivelly.

No Brasil, as leishmanioses representam um importante problema de saúde pública pela sua elevada incidência, ampla distribuição geográfica e marcante aumento na transmissão associados à urbanização da doença. Cães são considerados os principais reservatórios da leishmaniose visceral (LV) no ambiente urbano, tornando-se fundamental o aprimoramento do diagnóstico da doença nessa espécie. Este estudo objetivou a avaliação da técnica de imuno-histoquímica (IHQ) para o diagnóstico de Leishmania spp. em amostras de diferentes tecidos de cães recebidas no Núcleo de Patologia Quantitativa do Instituto Adolfo Lutz (NPQ-IAL). Amostras de tecidos coletadas de 134 cães, provenientes de municípios do Estado de São Paulo, positivos para LV por teste rápido (TR DPP®-Bio-Manguinhos), ensaio imunoenzimático-EIE/Elisa (Bio-Manguinhos) e pela reação em cadeia de polimerase, foram submetidas a marcação IHQ específica, em duplicata. A reação de IHQ apresentou sensibilidade de 98,51 %, especificidade de 100,00 % e acurácia de 98,61 %. A maior positividade foi detectada nas amostras de baço. O índice Kappa foi de 0,84 entre os resultados da análise dos tecidos em duplicata. A técnica de IHQ pode ser utilizada como uma técnica rotineira para o diagnóstico das leishmanioses caninas, sendo padronizada e implantada no NPQ-IAL.

Serological, parasitological and molecular tests for canine visceral leishmaniosis diagnosis in a longitudinal study / Testes sorológicos, parasitológicos e moleculares para o diagnóstico da leishmaniose visceral canina em estudo longitudinal

Abstract One of the measures to control visceral leishmaniosis (VL) in Brazil is the identification and culling of the canine reservoir. There is much controversy concerning this strategy, including the proper identification of positive dogs and the fact that the host-parasite relationship changes over time make it more challenging. A dynamic cohort of 62 dogs was followed every three months using serological and parasitological examinations and PCR. Positivity by PCR was higher than by serology and by parasitological examinations and showed a tendency to decrease over time, while serology tended to increase after six months. Concomitant positivity in all tests was observed in 10.4% of the samples, and negativity in 29.1%. Overall sensitivity ranged from 43.6 to 64.1%, and was not uniform over time. The proportion of dogs with or without clinical signs was not different by cytology or PCR but PCR was able to identify a larger number of asymptomatic dogs compared to ELISA and immunochromatography. PCR can be useful for surveillance of areas where cases of canine VL have not yet been detected and in which control strategies can be implemented to limit the spread of the disease. Despite the advance in diagnostic tools CVL diagnosis remains a challenge.

Resumo Uma das medidas de controle da leishmaniose visceral (LV) no Brasil se baseia na identificação e eliminação do reservatório canino. Existe considerável controvérsia relativa a esta estratégia incluindo a correta identificação dos cães positivos e a variação temporal da relação hospedeiro-parasita, o que torna esta medida ainda mais desafiadora. Uma coorte dinâmica de 62 cães foi acompanhada trimestralmente utilizando-se métodos sorológicos, parasitológicos e a PCR. A taxa de positividade por PCR foi maior em comparação à dos métodos sorológicos e parasitológicos, e mostrou tendência à diminuição com o passar do tempo, enquanto que a positividade sorológica apresentou tendência a aumento, após seis meses. Observou-se positividade concomitante em todos os testes em 10,4% das amostras e, negatividade concomitante, em 29,1%. A sensibilidade geral variou de 43,6% a 64,1%, não sendo uniforme ao longo do estudo. A proporção de cães com e sem sinais clínicos que foram positivos ao exame parasitológico ou à PCR não foi estatisticamente diferente. Contudo, foi possível identificar como positivos um maior número de animais assintomáticos por meio da técnica de PCR, em comparação aos testes ELISA e imunocromatográfico. A PCR pode ser bastante útil para a vigilância epidemiológica de áreas onde casos de LV canina ainda não tenham sido descritos e onde estratégias de controle podem ser implantadas para limitar a disseminação da doença. Não obstante o avanço nas ferramentas diagnósticas, diagnosticar a LVC continua um desafio.

Quantitative toxoplasma gondii oocyst detection by a modified Kato Katz test using Kinyoun staining (KKK) in ME49 strain experimentally infected cats / Detecção quantitativa de oocistos de Toxoplasma gondii, por um teste modificado de Kato Katz usando coloração de Kinyoun (KKK), em gatos infectados experimentalmente com a cepa ME49

We detected Toxoplasma gondii oocysts in feces of experimentally infected cats, using a Kato Katz approach with subsequent Kinyoun staining. Animals serologically negative to T. gondii were infected orally with 5x10² mice brain cysts of ME49 strain. Feces were collected daily from the 3rd to the 30th day after challenge. Oocysts were detected by qualitative sugar flotation and the quantitative modified Kato Katz stained by Kinyoun (KKK). In the experimentally infected cats, oocysts were detected from the 7th to 15th day through sugar flotation technique, but oocysts were found in KKK from the 6th to 16th day, being sensitive for a larger period, with permanent documentation. The peak of oocysts excretion occurred between the 8th to 11th days after challenge, before any serological positive result. KKK could be used in the screening and quantification of oocysts excretion in feces of suspected animals, with reduced handling of infective material, decreasing the possibility of environmental and operator contamination.

Detectamos oocistos de Toxoplasma gondii em fezes de gatos experimentalmente infectados, usando a abordagem de Kato Katz, com subseqüente coloração pelo método de Kinyoun. Animais sorologicamente negativos ao T. gondii foram infectados por via oral com 5x10² cistos da cepa ME49 de cérebros de camundongos. Fezes foram colhidas diariamente a partir do 3º até o 30º dia pós-infecção. Oocistos foram detectados por centrífugo-flutuação em sacarose qualitativa e pelo método quantitativo de Kato Katz modificado corado pela técnica de Kinyoun (KKK). Em gatos experimentalmente infectados, oocistos foram detectados do 7º ao 15º dia pela técnica de centrífugo-flutuação em sacarose, mas oocistos foram detectados do 6º ao 16º dia pelo KKK, sendo sensível por um período maior, com documentação permanente. O pico da excreção de oocistos ocorreu entre 8º a 11º dia pós-infecção, antes de resultado sorológico positivo. KKK pode ser utilizado na triagem e quantificação da excreção de oocistos em fezes de animais suspeitos, com redução da manipulação de material infectante, diminuindo a possibilidade de contaminação ambiental e do operador.

Freqüência de anticorpos anti-Toxoplasma gondii em mulheres, atendidas nas unidades da rede de saúde publica da região metropolitana de São Paulo (2001-2005) / Frequency of anti-Toxoplasma gondii antibodies in women attended at public health center network of São Paulo metropolitan region (2001-2005)

Toxoplasma gondii é um parasita intracelular obrigatório que pode infectar o homem e animais homeotérmicos. Nos indivíduos imunocompetentes a infecção é geralmente assintomática, os principais grupos atingidos gravemente pela doença são os indivíduos imunodeprimidos e as gestantes que adquirem a infecção durante a gestação. Neste trabalho foram analisadas 1485 amostras de soros de mulheres atendidas na rede pública de saúde da grande São Paulo, durante o período de janeiro de 2001 a julho de 2005. A detecção de anticorpos IgG anti-T.gondii foi realizada por meio de ensaio imunoenzimático(ELISA) e a técnica Imunofluorescência Indireta (IFAT) foi utilizada para detecção de anticorpos IgMe IgG anti- T.gondii. Das amostras analisadas 57,10% apresentaram anticorpos IgG anti-T.gondii, e 1,95% possuíam anticorpos específicos da classe IgM. Os inquéritos epidemiológicos realizados no Brasil demonstraram que a soroprevalência de anticorpos IgG anti-T. gondii varia de 40 a 80%, o que corroboram com os dados obtidos no presente estudo. Existe a necessidade de estudos que identifiquem as taxas de prevalência nas várias regiões brasileiras, com o intuito de implantar trabalhos de informação e conscientização da população para diminuição do risco de infecção congênita por T. gondii.

Ocorrência de vetores da esquistossomose mansônica no litoral norte do Estado de São Paulo, Brasil / Occurrence of schistosomiasis mansoni vectors on the Northern coast of the State of São Paulo, Brazil

Seguem detalhes da descoberta de exemplares de Biomphalaria tenagophila (dãOrbigny, 1835,) infectados por Schistosoma mansoni Sambon, 1907, em Caraguatatuba, e da introdução de Biomphalaria straminea (Dunker, 1848) em Ilha Bela, dois municípios da Região do Litoral Norte do território paulista. O novo foco da esquistossomose situa-se no Bairro Olaria; a presença de B. straminea foi detectada em um córrego da localidade de Barra Velha, juntamente com B. tenagophila. Esses registros motivaram a discussão dos riscos da expansão da esquistossomose, em conseqüência das más condições do saneamento básico predominantes na região.